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    HS Probe qPCR Mix (P2201-P2202-P2203-P2204-P2205)

    促销: 480.00~28800.00
    运费 ¥20.00
    P2201(1ml) P2202(1mlx5) P2203(1mlx10) P2204(1mlx50) P2205(1ml×100)

    HS Probe qPCR Mix

    Cat. #P2201,P2202,P2203,P2204,P2205

    产品简介

    HS Probe qPCR Mix用于探针法实时定量PCR2×浓缩预混液,使用时只需加入模板、引物和探针即可进行反应。本品含有类抗体技术修饰的热启动酶Hotstart Taq DNA聚合酶,配合东盛特制的Real Time PCR Buffer,不仅有效抑制引物二聚体和其他非特异性扩增,而且能够提高扩增效率,可以进行高灵敏度高特异性的PCR反应。本品在宽广的定量域内具有良好的线性关系,对靶基因定量准确、可信度高,重复性好。本品可搭配TaqMan等各类荧光探针使用,与常见定量PCR仪完美兼容,如ABI、Roche、Bio-Rad等。

    产品组成

    Component

    P2201

    P2202

    P2203

    P2204

    P2205

    2× HS Probe qPCR Mixa

    1 ml

    1 ml×5

    1 ml×10

    1 ml×50

    1 ml×100

    超纯水

    1 ml

    1 ml×5

    -

    -

    -

    a 包含Hotstart Taq DNA聚合酶,Aptamer,dNTP及反应缓冲液等。

    保存条件

    HS Probe qPCR Mix -20℃保存2年,4℃可短期保存。

    质量控制

    纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

    功能检测:经不同来源的模板和引物检测,产品具有优秀的特异性、灵敏性及可重复性等。

    应用举例

    1. 配制反应体系

    请于冰上配制以下反应体系:

    Component

    Volume

    Final concentration

    DNA template[1]

    1-4 μl

    Variable

    Forward primer (10 μM)[2]

    0.4 μl

    0.2 μM

    Reverse primer (10 μM)

    0.4 μl

    0.2 μM

    2× HS Probe qPCR Mix

    10 μl

    1×

    Probe (10 μM)[3]

    Variable

    0.1-0.5 μM

    ddH2O

    Variable

    -

    Total volume[4]

    20 μl

    -

    [1] DNA模板建议用量(20 μl体系):1-10 ng cDNA,或10-100 ng gDNA。加样体积不宜过小,以免造成较大的误差,但未稀释的cDNA不宜超过总体积的1/10。因此模板建议浓度(加样前):cDNA 1-10 ng/μl,gDNA 10-100 ng/μl。

    [2] 引物终浓度建议范围:0.1-1.0 μM, 通常引物终浓度为0.2 μM效果较好。

    [3] 使用探针的浓度与Real Time PCR扩增仪、探针种类和荧光标记物种类有关,使用时请参照相关说明。通常探针终浓度在0.1-0.5 μM之间。

    [4] 建议总体积不小于10 μl,以免造成较大的加样误差。具体体积范围参考仪器说明。

    注意:对于某些固定型号的仪器,需要添加ROX才能精确测定Ct值。由于ROX的使用体积较小,建议将ROX提前与qPCR Mix混匀使用。ROX用量参照具体仪器说明,下表仅供参考。

    Instruments

    ROX (100X)

    ABI PRISM 7000/ PRISM 7700/ 7300/ 7900HT/ Step One/ Step One Plus/ GeneAmp 5700

    1-2% (High ROX)

    ABI 7500/ 7500 Fast/ ViiA 7/ QuantStudio 6/7/12K Flex; Agilent Stratagene Mx3000P/ Mx3005P/ Mx4000

    0.2% (Low ROX)

    Bio-Rad CFX96/ CFX384/ iQ/ iQ5; MJ Research Opticon 2/ Chromo 4; Roche LightCycler 480/ 96; Corbett Rotor Gene G/ Q/ 3000/ 6000; Thermo PikoReal 96; Eppendorf MasterCycler ep realplex; Cepheid Smart Cycler

    No ROX

    2. 设定反应程序进行qPCR反应

    步法程序示例如下:

    Stage

    Temperature

    Time

    Cycle

    Initial denaturation

    95

    3 min

    1

    Denaturation

    95

    10 sec

    40

    Annealing & Extension[1]

    60

    30 sec

    [1] 仪器在此阶段进行信号采集,某些仪器要求时间在30秒以上,请根据仪器类型设置,如ABI 7300至少31秒,ABI 7500至少34秒。如需优化温度,建议在55-65范围内调整。

    若反应效果不佳,建议采用三步法扩增程序。

    经典三步法程序示例如下:

    Stage

    Temperature

    Time

    Cycle

    Initial denaturation

    95

    3 min

    1

    Denaturation

    95

    10 sec

    40

    Annealing

    60[1]

    15 sec

    Extension[2]

    72

    20 sec

    [1] 常用退火温度在55-65℃之间。退火温度一般设定为所用引物的Tm-5℃,若低于55℃,则以Tm值为退火温度,一般不低于55℃。

    [2] 仪器在此阶段进行信号采集,某些仪器要求时间在30秒以上,请根据仪器类型设置,如ABI 7300至少31秒,ABI 7500至少34秒。

    3. 分析结果

    观察扩增曲线;调整基线,计算Ct值;进行相对或绝对定量。

    注意事项

    ? 使用前Mix需要完全解冻,充分混匀。尽量避免多次反复冻融。短期使用可保存于4。

    ? 将(n+x)份反应液混匀后再分注到n个单管中,可降低加样误差。(n为重复次数,x为损耗量,一般为n1/10

    ? ABI的定量仪器大部分需要ROX校正管间差异,Bio-Rad的定量仪器不需要ROX校正。具体仪器请参照其使用说明。

    ? 轻轻混匀反应液,避免产生气泡,气泡会干扰荧光检测??伤彩崩胄娜コ?。

     引物的特异性、用量以及退火温度是影响实验结果的重要因素。务必设计特异性好的引物,随实验结果适当调整引物用量(0.1 μM-1.0 μM——特异性较差时减少引物用量,或以3为增量提高退火温度,扩增效率较低时增加引物用量。

    ? DNA模板的量应小于500 ng/反应,过高的模板量会引起非特异性扩增。应根据模板类型与基因表达量适当调整用量。

    ? 各类探针应参照相应的指南进行设计,并根据所用扩增仪类型、探针种类和荧光标记物种类等调整用量。

     

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    名称

    货号

    规格

    PCR Mix

    P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

    1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

    Power Green qPCR Mix

    P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

    1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

    1kb ladder

    M1181/M1182

    50/250

    DSTM5000

    M1111/M1112

    60/300

    高纯度质粒小提试剂盒

    N1011/N1012/N1013

    50/100/200

    通用RNA提取试剂盒

    R1051

    50

    基因组DNA快速提取试剂盒

    N1111/N1112

    50/100

    DNA凝胶回收试剂盒

    N1071/N1072/N1073

    50/100/200

    RT-PCR Kit

    R1011/R1012

    20/100


     


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